Các vấn đề thường gặp khi homogenizer siêu âm phá vỡ Escherichia coli

E. coli thể hiện protein nước ngoài. Khi được cách âm, nó được treo trong PBS chứa 1% triton-X-100. Hiệu quả siêu âm tốt hơn. Hiệu quả của 1% triton-X-100 vẫn còn rõ ràng. Các công trình, như Streptomyces.

Kết tủa vi khuẩn trực tiếp thêm mẫu 1buffer, thêm 5ml mercaptoethanol, trộn, ly tâm, đun sôi trong 10 phút, nạp trực tiếp, nhuộm và khử màu như sau: cho keo vào lượng chất lỏng nhuộm thích hợp trong lò vi sóng trong 1 phút, nhuộm dung dịch được thay thế bằng một lượng lớn Nước có thể được nấu trong lò vi sóng trong 10 phút.

Sau khi biểu thị protein tái tổ hợp, các tế bào đã bị phá vỡ bởi sóng siêu âm, sử dụng bể nước đá, 400W và 2S dừng lại trong 1S, nhưng một lượng lớn bọt được tạo ra trong một thời gian ngắn, ảnh hưởng đến hiệu quả nghiền. Cả bộ đệm pbs và tris đều giống nhau, và cuối cùng quá trình nghiền không hoàn thành. Nhưng protein mục tiêu của tôi nằm trong các tế bào không bị phá vỡ này, khiến tôi không thể có được kết quả thử nghiệm.

Hãy để tôi cung cấp cho bạn một phân tích về lý do tại sao tình huống này và giải pháp.

1. Bong bóng sẽ được tạo ra do vị trí đầu dò của bạn không được đặt tốt, đầu dò phải ở gần đáy, khoảng 1cm (tôi thường cách đáy 0,5cm), nhạc cụ sẽ có các mức công suất khác nhau, nhưng bạn có thể quan sát trang, có biến động nhưng đừng quá tích cực.

2. Super 3S dừng 10S, siêu âm khoảng 20 lần để thấy hiệu quả

3. Chú ý đến vị trí của sừng. Nếu bạn không đúng, bạn nên điều chỉnh kịp thời. Ngoài ra, từ góc độ nồng độ vi khuẩn, cố gắng tăng thể tích khi nghiền, cường độ không được vượt quá 60%.

4. Thử 8S cho Super 8S. Đối với một số protein vi khuẩn, phương pháp của bạn rất khó để tản nhiệt, dẫn đến biến tính protein và tạo bọt. Tốt nhất là tạm dừng lâu hơn một chút. Điều này là phổ biến hơn trong các hình thức bao gồm các cơ quan.