Câu hỏi thường gặp về các ô bị hỏng

1. E. coli thể hiện protein nước ngoài. Khi sonicated, nó bị đình chỉ trong PBS chứa 1% triton-X-100. Hiệu quả của siêu âm là tốt hơn. Hiệu quả của 1% triton-X-100 vẫn còn rõ ràng. Một số vi khuẩn khác cũng hoạt động, chẳng hạn như Streptomyces. Sau khi biểu hiện protein tái tổ hợp, các tế bào bị gián đoạn do gián đoạn tế bào siêu âm, sử dụng bồn đá, 400w và nghiền nát 2 giây trong 1 giây, nhưng một lượng bọt lớn được tạo ra trong một thời gian ngắn, ảnh hưởng đến sức mạnh nghiền. Cả hai pbs và tris buffers đều như thế này. Phân đoạn không đầy đủ, và protein mục tiêu nằm trong các tế bào không gián đoạn này, tôi nên làm gì?

Phân tích: bong bóng sẽ được tạo ra bởi vì vị trí thăm dò không được đặt tốt; đầu dò phải gần đáy, khoảng 0,5-1cm; sức mạnh sẽ thay đổi tùy theo thiết bị, nhưng mức chất lỏng có thể được quan sát thấy, có dao động nhưng không quá mạnh; bạn có thể chọn các tế bào siêu âm Máy nghiền bị hỏng cho 3s trong 10s và bị hỏng trong 20-30 lần. Vị trí của sừng cũng nên được lưu ý. Nếu âm thanh sai, cần điều chỉnh kịp thời; xem xét nồng độ vi khuẩn. Cố gắng tăng âm lượng khi nghiền, sức mạnh của Zui không được vượt quá 60%; cố gắng phá vỡ 8s trong 8s, đối với một số protein của vi khuẩn, rất khó để tiêu tan protein gây ra sự biến tính protein để tạo ra bong bóng, có thể bị tạm dừng lâu hơn một chút. Một protein được tìm thấy dưới dạng các cơ quan bao gồm.

2. Các điều kiện cho sonication của Streptomyces (actinomycetes) là gì?

Phân tích: actinomycetes thuộc về tỷ lệ mol (G + C) (mol%) của nhóm phân nhánh Gram dương (Eubacteria) trên cây phát sinh của hệ thống tiền sinh vật, có đặc điểm sinh học và phân tử duy nhất đối với sinh vật nhân chuẩn. Tuy nhiên, trong các nhóm khác nhau của nó, thành phần hóa học của thành tế bào rất khác nhau. Trong siêu âm E. coli, 400W được sử dụng, và phương pháp phá vỡ 5s cho 5s là hiệu quả, nhưng nó được sử dụng trên Streptomyces, và nó không có hiệu lực do sự khác biệt trong thành phần thành tế bào. Việc điều trị trước khi quay của Streptomyces (actinomycetes) thường được cấu hình đến một nồng độ nhất định của hệ thống treo vi khuẩn. Các điều kiện cụ thể cho việc nghiền bằng cách sử dụng thiết bị phá sóng tế bào siêu âm là: thu thập vi khuẩn trong dung dịch nuôi cấy 24 giờ ở mức 5 000 r / phút trong 5 phút để thu thập các tế bào; rửa bằng dung dịch đệm pH Na2HPO-NaH2PO pH 7,5 lần, và sau đó Các tế bào được tạo thành một huyền phù vi khuẩn 1: 3 bằng cách sử dụng bộ đệm. Đặt trong một ống nghiệm nhựa lớn 40 ml; đặt ống nghiệm nhựa lớn trong bồn đá và nghiền nó bằng bộ phận ngắt siêu âm (công suất 200W, 1/2 "thăm dò, nghiền nát 30 giây, 30 giây liên tục), dung dịch nghiền ở 12 000 r / phút Máy ly tâm ở tốc độ cao trong 30 Các tế bào rửa cũng có thể được rửa sạch một lần bằng nước muối được làm lạnh trước hoặc Tris-HCl ở pH 8. Ngoài ra, liều siêu âm thay đổi rất nhiều với lượng mẫu và vi khuẩn. 600w, nghiền cho 5s, dừng lại cho 5s, tắm đá, và nồng độ cuối cùng của 1 mM PMSF được thêm vào.Để xác định cường độ siêu âm thích hợp và tần số, nó là cần thiết để kiểm tra xem vi khuẩn là hoàn toàn bị hỏng bất cứ lúc nào.